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Composición probiótica para Argopecten purpuratus y procedimiento de cultivo de este en el que se utiliza dicha composición probiótica

Research Output:
Patent
Patent

Publication Information

Output type

Research Output:
Patent
Patent

Original language

Spanish (Peru)

Publication milestones

  • Submitted - 30/07/2021
  • Published - 22/02/2022

Publication status

Published - 22/02/2022

Publisher

Instituto Nacional de Defensa de la Competencia y de la Protección de la Propiedad Intelectual

Abstract

La presente invención se refiere a un procedimiento de cultivo de Argopecten purpuratus, caracterizado porque comprende: a) capturar muestras de adultos de concha de abanico mediante buceo autónomo; b) extraer el contenido intestinal de las muestras de adultos de concha de abanico mediante punción con jeringa, donde se extrae un pellet fecal mediante homogenización con solución fisiológica estéril con glicerol, inyectando y extrayendo la solución en el conducto intestinal para disolver el pellet fecal hasta obtener un homogenizado; c) transferir el homogenizado a un tubo eppendorf estéril que se mantiene en refrigeración a 4°C; d) realizar los aislamientos primarios en 5 diferentes medios de cultivo: agar marino (AM), agar nutritivo (AN), agar Man Rogosa-Sharpe (MRS) (Merck), agar tiosulfato citrato bilis sacarosa (TCBS) (Merck) y Agar Medio Mínimo; e) caracterizar morfológicamente y hacer el reconteo de las colonias de manera permanente, transfiriéndose las nuevas colonias a nuevas placas de agar para la obtención de cepas puras; f) verificar la pureza de las cepas mediante la observación y comparación de características culturales en referencia al aislamiento primario, mediante la observación en el microscopio mediante tinción Gram; g) preservar las cepas resuspendiendo cepas de cultivos jóvenes de cada una de las cepas en un medio de cultivo fresco, adicionando gliceros al 20% (v/v) como un agente crioprotector, almacenando las muestras a -80°C; h) identificar molecularmente los cultivos activos de cada una de las cepas seleccionadas, mediante la amplificación PCR del ADN genómico, usando cebadores universales para bacterias GM3 forward y GM4 reverse de la subunidad pequeña del ácido ribonucleico ribosomal (ARNr) 16S, secuenciando el genoma para identificar su similaridad con la SEQ ID NO: 2; i) realizar pruebas de antagonismo de las cepas seleccionadas mediante la técnica "Cross streak" y evaluar la actividad antibacteriana de los extractos de las cepas que logran inhibir todas las cepas patógenas mediante la presencia de halos de inhibición; j) llevar a cabo pruebas de supervivencia de larvas en experimentos de bajo volumen en matraces de dos litros observándose la evolución de crecimiento y supervivencia de larvas por 10 días, luego utilizar Streptomyces sp para prueba en campo usando tanques o pozas de 7000 litros; k) tomar muestras de Streptomyces sp criopreservadas en el paso g), reactivar el cultivo en fermentador con el medio adecuado para obtener biomasa bacteriana suficiente que es peletizada por centrifugación hasta obtener un pellet celular, el cual es sometido a liofilización; l) en la liofilización, el pellet celular se mezcla con una solución crioprotectora y trasladar la mezcla a viales para congelamiento gradual de la muestra para preservar el buen estado de las células, encender la bomba de vacío hasta una presión de 0.050 mBar. El proceso de liofilización dura de 24-48 h, trasladándose el liofilizado a un tubo de centrífuga estéril donde se pulveriza; m) el polvo o liofilizado es utilizado como alimento para larvas de concha de abanico en estadio inicial, adicionándose 20 gramos para 7000 litros; n) medir la supervivencia mediante fórmulas de tasa de supervivencia y tasa relativa de supervivencia.

Sustainable Development Goals

  • SDG 12 - Responsible Consumption and Production
    SDG 12 Responsible Consumption and Production
  • SDG 13 - Climate Action
    SDG 13 Climate Action
  • SDG 17 - Partnerships for the Goals
    SDG 17 Partnerships for the Goals